Diabetes Mellitus: Técnica molecular alternativa

Western Blott para determinar  la insulina y la señalización AMPK.

Se lisaron muestras de tejido congelado y células aisladas / cultivadas en tampón de lisis RIPA modificado. Las muestras se separaron en geles de dodecilsulfato sódico-poliacrilamida al 8-10% y luego se transfirieron a membranas de fluoruro de polivinilideno.

Las membranas se bloquearon con leche sin grasa al 5% en Trisbuffered de solución salina con Tween 20 al 0,1% durante 1 h a temperatura ambiente y después se sondearon durante la noche a 4ºC con anticuerpos primarios, seguido de incubación con fosfatasa alcalina conjugada secundaria a anticuerpo durante 1 h a temperatura ambiente.

Las membranas se desarrollaron con un reactivo de quimi – fluorescencia y fueron escaneados por el sensor de imágenes Storm 860 (GE, Healthcare, Piscataway, NJ).

 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

Western blotting to determine inflammatory, insulin and AMPK signaling (2012).

http://diabetes.diabetesjournals.org/content/diabetes/suppl/2012/07/19/db11-1373.DC1/DB111373SupplementaryData.pdf